Расчет количества эритроцитов

Содержание
  1. Анализ количества эритроцитов
  2. Методика автоматического подсчета эритроцитов
  3. Расчет количества эритроцитов: Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят исходя из
  4. Подсчет количества эритроцитов
  5. Подсчет количества эритроцитов в крови, моче, ликворе
  6. Унифицированный метод подсчета эритроцитов
  7. Подсчет эритроцитов камерным методом
  8. Раствор для подсчета эритроцитов
  9. Какой способ для подсчета эритроцитов лучше?
  10. Ошибки при подсчете эритроцитов
  11. Подсчет количества эритроцитов в моче
  12. Подсчет эритроцитов в ликворе
  13. Подсчет эритроцитов в камере Горяева — каким образом происходит вычисление уровня эритроцитов?
  14. Строение камеры Горяева
  15. Разбавление крови с целью исследования
  16. Разбавление крови в меланжере
  17. Разбавление крови в пробирке
  18. Подсчет количества эритроцитов
  19. Возможные причины искажения результата

Анализ количества эритроцитов

Расчет количества эритроцитов

Принцип. Подсчет количества эритроцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной камеры и пересчет на 1 мкл или 1 л крови в соответствии с объемом и разведением крови.

Реактивы:

  • разводящая жидкость — 0,9% раствор натрия хлорида или раствор Гайема: хлорид ртути II (HgCl2) — 0,5 г;
  • натрия сульфат (Na2SO4) — 5 г;
  • натрия хлорид — 1 г;
  • вода дистиллированная — до 200 мл.

Ход определения. Исследуемую кровь необходимо развести в 200 раз. Для этого в пробирку наливают 4 мл разводящей жидкости. В пипетку набирают 0,02 мл крови.

Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей, кровь выдувают на дно пробирки, а пипетку промывают верхним слоем жидкости, повторно набирая и выдувая ее в пробирку (пипетируя). Содержимое пробирки перемешивают и оставляют до исследования.

Эритроциты рекомендуется считать с помощью счетной камеры не позднее 3 ч после взятия крови.

Устройство и подготовка к работе счетной камеры Горяева. Счетная камера Горяева (далее — камера) представляет собой толстое, прозрачное, прямоугольное стекло с двумя сетками, выгравированными на его поверхности. На боковых участках стекла нанесены основные показатели и название камеры.

Сетки отделены друг от друга поперечной канавкой, что препятствует затеканию жидкости из одной сетки в другую при ее заполнении. Двумя глубокими продольными канавками сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, к которым притираются шлифованные покровные стекла. Поверхность этих пластинок находится на 0,1 мм выше участков камеры, на которые нанесена сетка.

Сетка камеры Горяева образована системой разграничительных линий, проведенных взаимно перпендикулярно.

Она состоит из 3600 малых квадратов, сторона которых равна 0,05 (1/20) мм; высота камеры, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла, составляет 0,1 мм; площадь — 1/400 мм2; объем — 1/4000 мм3 (мкл); и 225 больших квадратов со стороной 1/5 мм; площадью 1/25 мм2 и объемом 1/250 мм3 (мкл). Длина стороны всей сетки составляет 3 мм, площадь — 9 мм2, объем — 0,9 мм3 (мкл).

Камеру перед работой тщательно моют водой, вытирают насухо; так же подготавливают шлифованное покровное стекло. Камеру Горяева берут в руку. На участок камеры, где нанесена сетка, укладывают шлифованное покровное стекло.

Затем стекло берут и другой рукой, при этом нижняя поверхность камеры находится на двух средних пальцах, два вторых пальца придерживают ее спереди.

Свободными двумя первыми пальцами притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по поверхности прямоугольных стеклянных пластинок до появления цветных колец Ньютона в местах плотного прилегания (притирания) покровного стекла к поверхности прямоугольных пластинок камеры (это свидетельствует о высоте камеры — 0,1 мм).

Заполнение камеры Горяева. Заполняют счетную камеру разведенной кровью, предварительно несколько раз встряхнув содержимое пробирки.

Затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой с оплавленным концом отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к щели, образующейся между шлифованным стеклом (покровным) и счетной камерой, жидкость заполняет пространство над сеткой.

Обычно одну из сеток заполняют для подсчета эритроцитов, другую — для подсчета лейкоцитов. При заполнении камеры следят за тем, чтобы в пространстве над сеткой не было пузырьков воздуха и жидкость не затекала в бороздки.

Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания эритроцитов.

Подсчет клеток. Не меняя горизонтального положения, камеру помещают на столик микроскопа и с помощью малого увеличения (объектив 8х, окуляр 10х) находят верхний (дальний) левый край сетки (для лучшего контрастирования опускают конденсор и прикрывают диафрагму). Считают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т.

е. в 80 малых квадратах. Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали сетки. Для того чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не попали в счет дважды, принято для каждого квадрата, кроме клеток, лежащих внутри квадрата, считать расположенные на двух определенных линиях (например, левой и верхней).

Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят по формуле:

где X — число эритроцитов в 1 мкл крови; а — число сосчитанных эритроцитов; 200 — степень разведения крови; 80 — число просчитанных малых квадратов; 1/4000 — объем малого квадрата в мкл.

Причины ошибок.

  1. Неточность при взятии крови в пипетку.
  2. Неудовлетворительная градуировка пипеток.
  3. Образование сгустка крови.
  4. Неправильное притирание покровного стекла камеры или недостаточная его толщина (менее 0,3 мм).
  5. Подсчет сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не успели осесть на дно.
  6. Плохо вымытые и недостаточно высушенные пипетки и пробирки.
  7. Недоброкачественность реактивов, вызывающая гемолиз.
  8. Любое отклонение от правил подготовки камеры, ее заполнения и подсчета клеток.

Примечание. При гемолитических анемиях, В12-дефицитной анемии подсчет эритроцитов следует осуществлять незамедлительно после взятия крови, так как они быстро разрушаются.

Методика автоматического подсчета эритроцитов

Осуществляется с помощью счетчиков и гематологических анализаторов, выпускаемых различными фирмами, например, Becman Coulter (Швейцария), Sysmex (Япония), Hoffman-La Roche (Швейцария), Serono (США) и др.

При работе с гематологическими счетчиками подготовка пробы (разведение) осуществляется вручную. При использовании гематологических анализаторов отбор пробы крови и ее обработка происходят без участия лаборанта.

Принцип работы большинства анализаторов основан на кондуктометрическом методе: определенное количество разведенной изотоническим раствором натрия хлорида или другого электролита крови пропускается через микроотверстие, проходящая через него клетка увеличивает сопротивление между электродами, и возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.

Ход исследования выполняется в соответствии с инструкцией, прилагаемой к анализатору.

Нормальные величины. Количество эритроцитов в крови здорового человека, по данным А. И. Воробьева (1985), у мужчин составляет 4,0— 5,1 × 1012/л, у женщин — 3,7—4,7 × 1012/л.

Клиническое значение. Снижение количества эритроцитов (эритроцитопения) — один из основных критериев анемического синдрома. От истинной анемии необходимо отличать гидремию, связанную с увеличением объема плазмы за счет притока тканевой жидкости (например, при схождении отеков).

Причинами анемий служат кровопотери, нарушения кроветворения в костном мозге (дефицит железа, фолиевой кислоты, витамина В12, апластические процессы) и повышенный гемолиз.

Степень эритроцитопении варьируется и в тяжелых случаях (апластическая анемия, гемолитическая анемия в период криза, В12-дефицитная анемия) может достигать 1 × 1012/л и менее.

Кроме этого, уменьшение количества эритроцитов наблюдается при лейкозах, множественной миеломе, неходжскинских лимфомах, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, метастазах злокачественных опухолей и др., а также при недостаточном содержании белка в пище, голодании, вегетарианской диете.

Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови называется полиглобулией или эритроцитозом. В физиологических условиях полиглобулия наблюдается у новорожденных первые 3 дня жизни (временное сгущение крови в результате потери жидкости организмом при внезапном переходе к легочному дыханию и кожной респирации), у взрослых — при усиленном потоотделении, голодании.

При подъемах на большую высоту эритроцитоз обусловлен не сгущением крови, а действительным повышением продукции эритроцитов в связи с гипоксией. Эритроцитозы наблюдаются при патологических состояниях как симптомы целого ряда заболеваний (вторичные эритроцитозы). Вторичные симптоматические эритроцитозы делят на абсолютные и относительные.

Причиной абсолютных полиглобулий является реактивное усиление эритропоэза с увеличением массы циркулирующих эритроцитов (при врожденных пороках сердца, хроническом обструктивном бронхите, гипернефроидном раке, гемангиобластоме мозжечка и др.).

Сгущение крови без увеличения количества эритроцитов в результате уменьшения объема плазмы при длительной рвоте, диарее, ожогах лежит в основе относительных полиглобулий.

От симптоматических эритроцитозов следует отличать заболевания крови, относящиеся к гемобластозам и протекающие с увеличением количества эритроцитов, а порой лейкоцитов и тромбоцитов (истинная полицитемия).

Источник: http://onlab.info/sanguis/haema5.html

Расчет количества эритроцитов: Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят исходя из

Расчет количества эритроцитов

Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого квадрата (1/4000 мкл) по следующей формуле:

Х= (ах 4000×200)/200,

где X – число эритроцитов в 1 мкл крови;

а – число сосчитанных эритроцитов.

В результате сокращения X = а х 10 000.

Причины ошибок при подсчете эритроцитов:

1) неточность при взятии крови в пипетку;

2) неудовлетворительная градуировка пипеток;

3) образование сгустка крови;

4) неправильное притирание покровного стекла камеры или недостаточная его толщина (менее 0,3 мм);

5) подсчет производят сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не успели осесть на дно;

6) плохо вымытые и недостаточно высушенные пипетки и пробирки;

7) недоброкачественность реактивов, вызывающих гемолиз;

8) любое отклонение от правил подготовки камеры, ее заполнения и подсчета клеток.

Метод автоматического подсчета эритроцитов с помощью счетчиков и

гематологических анализаторов облегчает выполнение этого исследования и делает его более производительным.

Унифицированная методика автоматического подсчета эритроцитов

При работе с гематологическими счетчиками подготовка пробы (разведение) осуществляется вручную. При использовании гематологических анализаторов отбор пробы крови и ее обработка происходят без участия лаборанта.

Принципы работы

Принцип работы большинства анализаторов основан на кондуктометрическом методе: определенное количество разведенной изотоническим раствором натрия хлорида или другого электролита крови пропускается через микроотверстие, проходящая через него клетка увеличивает сопротивление между электродами, и возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.

Ход исследования

Ход исследования выполняется в соответствии с инструкцией, прилагаемой к анализатору.

Нормальные величины

Количество эритроцитов в крови здорового человека составляет, по данным А. И. Воробьева, у мужчин – 4,0-5,1 Т/л, у женщин – 3,7-4,7Т/л.

Клиническое значение

Снижение количества эритроцитов (эритроцитопения) является одним из основных критериев анемического синдрома. От истинный анемии необходимо отличать гидремию, связанную с увеличением объема плазмы за счет притока тканевой жидкости.

Причинами анемии являются кровопотери, нарушения кроветворения в костном мозге и повышенный гемолиз.

Кроме того, уменьшение количества эритроцитов имеет место при лейкозах, множественной миеломе, неходжкинских лимфомах, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, метастазах злокачественных опухолей и др.

Уменьшение количества эритроцитов наблюдается также при недостаточном содержании белка в пище, голодании, вегетарианской диете. Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови называется полиглобулией или эритроцитозом. Причины эритроцитозов представлены в таблице 20.

Таблица 20. Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови

Виды Заболевания (клинические ситуации)
Абсолютный эритроцитоз (повы­шенная продукция эритроцитов): 1) первичный эритроцитоз;2) вторичный эритроцитоз:а)вызванный гипоксией;б) вызванный повышенной продукцией эритропоэтина;в) связанный с избытком адренокортикостероидов или катехоламиновЭритремияЗаболевания легких, врожденные пороки сердца, пребывание на высоте, синдром Пиквика (ожирение).Гипернефроидный рак, гидроне­фроз и поликистоз почек, стеноз почечной артерии, рак яични­ков. Ангиобластома мозжечка. Синдром Кушинга, феохромацитома, гиперальдостеронизм
Относительный эритроцитоз (вследствие гемоконцентрации)Потеря жидкости организмом (потоотделение, рвота, понос, ожоги, прием диуретиков, алкоголизм, стресс)
Смешанный эритроцитоз (вследствие сгущения крови и плацентарной трансфузии)Физиологический эритроцитоз новорожденных

В клинической практике морфологию эритроцитов обычно исследуют в окрашенных мазках крови.

Окраска эритроцитов

Эритроциты окрашиваются кислыми красителями в розовато-красный цвет. Степень оксифилии клетки обусловлена присутствием гемоглобина и его количеством. Эритроциты здоровых людей имеют равномерную окраску и небольшое просветление в центре (нормохромия).

Бледная окраска эритроцитов с широкой неокрашенной центральной частью называется гипохромией. Гипохромия эритроцитов обусловлена низким содержанием гемоглобина в эритроцитах и чаще характерна для дефицита железа, но также имеет место при свинцовом отравлении, талассемии.

Гипохромия обычно сочетается с микроцитозом.

Выделяют три степени гипохромии:

– 1 (+) – просветление в центре несколько больше нормы;

– 2 (++) – окрашенная часть представлена в виде узкой ленты;

– 3 (+++) – окрашенная часть представлена в виде очень узкого кольца.

Усиленная окраска эритроцитов называется гиперхромией, обусловлена увеличением объема эритроцитов и обычно сочетается с макрои мегалоцитозом.

Анизохромия – различная интенсивность окрашивания отдельных эритроцитов или участков одного эритроцита, часто встречается при железодефицитной анемии.

Полихроматофилия – недостаточное накопление гемоглобина в эритроцитах с остатками базофильной субстанции. Незрелый эритроцит воспринимает и кислую, и щелочную краску и окрашивается в цвет от синего до серовато-розового. В норме встречаются единичные полихроматофильные эритроциты. Число их может увеличиваться при усиленном эритропоэзе постгеморрагические, гемолитические анемии.

Выделяют три степени полихромазии:

1) Р1+ – единичные полихроматофилы через каждые 2-3 поля зрения;

2) Р2++ -1-4 полихроматофила в каждом поле зрения;

3) РЗ+++ – более 10 полихлорматофилов в каждом поле зрения.

При морфологическом исследовании эритроцитов необходимо определить наличие в мазке патологических форм эритроцитов или включений в эритроцитах.

Эритроциты с ядром – нормобласты, эритробласты – встречаются при самых разнообразных состояниях.

Наиболее высокая степень содержания нормобластов имеет место при гемолитической анемии в момент гемолитического криза, при хроническом миелофиброзе, метастазах злокачественных опухолей в костный мозг.

Включения

При В12-дефицитной анемии и после спленэктомии встречаются эритроциты с остатками ядер в виде колец Кебота, телец Жолли, пылинок Вейденрейха.

Тельца Жолли – остатки ядерного хроматина округлой формы размером 1 мкм и более в количестве от 1 до 3 в эритроците, красно-фиолетового цвета. Кольца Кебота – остатки ядерной оболочки в виде тонких, нитеобразных колечек, окрашенных в красный цвет.

Пылинки Вейденрейха – остатки ядерного вещества розового, иногда голубого цвета, встречаются при тяжелых анемиях, главным образом – мегалобластных. Тельца Гейнца – Эрлиха представляют собой обычно одно круглое включение (реже 2-3) размером 1-2 мкм, располагающееся по периферии эритроцита.

При обычной окраске по Романовскому они не видны. Определяют их по методике Дейге с метиловым фиолетовым. Тельца при этом окрашиваются в пурпурно-красный цвет.

Появление телец Гейнца – Эрлиха является доказательством тяжелого токсического повреждения веществами, окисляющими гемоглобин (нитробензол, анилин, нитроглицерин, сульфаниламидные препараты) и приводящими к гемолизу.

Эритроцитометрия (измерение диаметра эритроцитов)

Унифицированная микроскопическая методика измерения диаметра эритроцитов с помощью окуляр-микрометра в окрашенном мазке крови.

Клиническое значение

Сдвиг эритроцитометрической кривой влево чаще имеет место при железодефицитных анемиях, микросфероцитозе, талассемии, свинцовом отравлении. Сдвиг эритроцитометрической кривой вправо наблюдается при В12- и фолиеводефицитной анемиях, алкоголизме, диффузных поражениях печени.

Общий объем эритроцитов (гематокритная величина) Гематокритная величина, или показатель гематокрита, дает представление о соотношении между объемами плазмы и форменных элементов крови (главным образом – эритроцитов), полученном после центрифугирования крови. Принято гематокритной величиной выражать объем эритроцитов.

Метод определения гематокрита с помощью микроцентрифуг

Нормальные величины

У здоровых людей гематокрит венозной и капиллярной крови равен:

1) для мужчин – 40-48 % (или 0,4-0,48);

2) для женщин – 36-42 % (или 0,36-0,42);

3) у детей:

а) 0,5 месяца – 41-65 %;

б) 1 месяц – 33-55 %;

в) 2 месяца – 26-42 %;

г) 4 месяца – 32-44 %;

д) 6 месяцев – 31-41 %;

е) 9 месяцев – 32-40 %;

ж) 12 месяцев – 33-41 %.

Клиническое значение

Снижение гематокрита характерно для анемий (до 20-25 %), по его величине можно судить о степени анемии.

Существенное увеличение (до 65 %) наблюдается при полицитемии, менее значительное (50-55 %) – при симптоматических эритроцитозах, сопутствующих порокам сердца, легочной недостаточности, некоторых гемоглобинопатиях. Величина гематокрита характеризует степень гемоконцентрации и гемодилюции.

Используют значения гематокрита для расчетных показателей, характеризующих эритроциты: средний объем, средняя концентрация гемоглобина, а также для ряда биохимических показателей.

Определение гематокрита на гематологических анализаторах входит в программу. Обычно используют либо кондуктометрический, либо микроцентрифужный метод.

В некоторых анализаторах гематокрит определяется расчетным путем, исходя из количества эритроцитов в определенном объеме крови (например, 1 мкл) и среднего объема одного эритроцита.

Ход определения осуществляется в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.

Источник: https://med-books.info/terapiya-anesteziologiya-intensivnaya/raschet-kolichestva-eritrotsitov-60614.html

Подсчет количества эритроцитов

Расчет количества эритроцитов

В крови содержится в среднем 4,5-5 х 1012/л (в 1 мкл – 1 мм3 крови обычно содержится эритроцитов у мужчин 4500000—5000000, у женщин: 4000000—4500000.

Для подсчета форменных элементов кровь, взятую из пальца, разбавляют в специальных смесителях (меланжерах), чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для подсчета числа эритроцитов пользуются счетной камерой. Каков бы ни был внешний вид камеры, принцип ее устройства один и тот же.

На предметном стекле в углублении высотой 0,1мм расположена сетка. В камере Горяева (рис.а), кото­рой чаще всего пользуются, сетка состоит из 225 больших квад­ратов. Из них 25 квадратов дополнительно разделены на 16 ма­леньких. Каждый разделенный квадрат со всех сторон окружен неразделенными, что облегчает счет (рис.

б).

Для подсчета форменных элементов кровь разбавляют чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют 3% гипертонический раствор хлорида натрия, в котором эритроциты сморщиваются.

Ход работы:

1. Перед началом работы необходимо разобраться в устройстве сетки счетной камеры. Для этого помещают камеру под микроскопом и сначала на малом, а затем под большим увеличением рассматривают сетку, находят малые квадратики и большие квадраты.

2. В предварительно высушенную чистую коническую пробирку точно отмеривают 4 мл физиологического раствора и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь набирают в капилляр из гемометра Сали). Получается разведение 1:200. Взвесь тщательно перемешивают (пробирочный способ Н.М.Николаева).

3.Выпустив предварительно наружу 1-2 капли, наносят капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стёклышком. На предметное стекло в том месте, где на нем расположена сетка, поместите покровное стекло и тщательно прижмите его большими пальцами рук (рис. 3).

До появления ньютоновых колец – окрашенных в цвет радуги полосок. Одну треть содержимого смесителя выпустите на ватку, а следующую каплю вы­дуйте на предметное стекло подпокровное. Поместите предметное стекло на столик микроскопа, найдите при малом увеличении сетку. Затем, установив большое увеличение, произведите подсчет.

Считать эритроциты удобнее при большом увеличении (окуляр х 7, объектив х 40).

Несмотря на перемешивание, эритроциты не совсем равно­мерно распределяются в поле зрения. В этом можно убедиться, если подсчитать количество эритроцитов в нескольких соседних малых квадратах.

Чтобы быть уверенным в точности подсчета, обычно эритроциты сосчитывают в 80 малых квадратах (5 больших квадратов, расположенных в разных местах сетки, например по диагонали).

Рекомендуется вначале на листе бумаги нарисовать пять больших квадратов, разделить их на 16 маленьких и в каждый маленький квадратик вписать найденное число эритроцитов.

Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границах между маленькими квадратиками, руководствуются правилом Егорова: «Относящимся к данному квадратику являются эритроциты, лежащие внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не считаются».

Подсчитав т.о. число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадратике А/80. Сторона одного малого квадрата равна 1/20 мм, следовательно, его площадь 1/400 мм2.

Глубина камеры—0,1 мм, отсюда объем пространства над одним ма­лым квадратом составит 1/400·1/10=1/4000 мм3.Если в объеме над 80 ма­лыми квадратами найде­но А эритроцитов, то на один малый квадрат при­ходится А/80.

Это в объеме 1/4000 мм3, Зная, что объем части камеры под одним маленьким квадратиком равен 1/4000 мм3, умножают найденное число на 4000. Получается число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на разведение – 200, получают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови.

Т.о., формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х = А · 4000 · 200 В 1 мл крови Х – искомое число эритроцитов
А – число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках
Х = А · 4000 · 200 · 106 В 1 л крови

где Х – искомое число эритроцитов,

А – число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: https://studopedia.ru/17_62306_podschet-kolichestva-eritrotsitov.html

Подсчет количества эритроцитов в крови, моче, ликворе

Расчет количества эритроцитов

Подсчёт эритроцитов производится в крови и моче. Для этого применяется ручные и автоматические методы исследования. Оба из них имеют положительные и отрицательные стороны. Метод назначает врач после осмотра пациента. Выявляется целостность или нарушение формы эритроцитов, их повышение или снижение, определяют наличие кровотечения.

Существует несколько методов подсчета эритроцитов в крови, который подбирает врач в зависимости от необходимости анализа (проверка здоровья, подозрение на заболевание).

  • Полуавтоматический анализатор. Точно определяет количество эритроцитов в одном миллилитре биологической жидкости. Аппарат не может идентифицировать качество клеток.  При его применении уменьшается число врачебных ошибок, так как человек осуществляет только подготовку к исследованию, разведение биологической жидкости. Прибор подсчитывает показатель автоматически.
  • Счётная камера. Подсчет красных кровяных телец вручную с помощью микроскопа. Кроме вычисления суммы клеток возможна идентификация их качества, степени поврежденности, изменения формы и размера. Возможен подсчет количества деформированных эритроцитов. Подробно о подсчете эритроцитов в счетной камере.
  • Подсчет эритроцитов в мазке крови. Необходимо разведение, так как клетки наслаиваются друг на друга. Возможен подсчет эритроцитов с базофильной зернистостью, которая просматривается на большом увеличении.

Унифицированный метод подсчета эритроцитов

Унифицированными методами подсчета эритроцитов являются:

  • использование полуавтоматического анализатора;
  • применение счетной камеры.

Для обоих исследований необходимо разведение биологической жидкости, которое производится вручную лаборантом. Соотношение разведения зависит от используемого реагента.

Если используется полуавтоматический анализатор, он автоматически забирает жидкость при постановке проверки внутрь него пробирки. При использовании счетной камеры, дальнейшую работу производит только врач-лаборант.

Методы являются унифицированными, так как необходимы для различных целей. Полуавтоматический анализатор точно высчитывает количество форменных элементов. Использование микроскопа и счетной камеры позволяет полностью рассмотреть все клетки под большим и малым увеличением. Врач может выявить отклонения в размере и форме, образование атипичных клеток, повреждение внутренней и внешней части.

Первоначально назначают исследование биологических жидкостей с помощью полуавтоматического анализатора. Если соотношение клеток не находится в пределах нормы, он означает подсчет с помощью микроскопа.

Подсчет эритроцитов камерным методом

При использовании камерного подсчета эритроцитов необходима ее предварительная подготовка. Ее дезинфицируют в спирте, тщательно протирают до появления радужных кругов. Сверху помещают покровное стекло, через которое возможен осмотр с помощью микроскопа. Оно позволяет жидкости распределиться по полости, устраняет пузырьки.

Для проведения исследования необходимо выполнить несколько этапов.

  • Разведение биологической жидкости в 200 раз. Для этого берут 1 мл крови, добавляются 4 мл реагента. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.
  • Подсчет эритроцитов рекомендуется проводить сразу после взятия крови, так как при некоторых заболеваниях эритроциты быстро разрушаются.
  • Берут небольшой образец жидкости с помощью стеклянной палочки, наносят на область углубления в камере. Ждут несколько минут, чтобы она распределилась по сетке. Должны уйти все пузырьки воздуха.
  • Подсчет клеток осуществляется помощью малого увеличения микроскопа. Если необходимо рассмотреть внутреннюю структуру форменного элемента, изображение переводят на большое увеличение. Клетки считают в 80 малых квадратах. Микроскоп перемещается слева направо, вниз, справа налево. Это предотвращает подсчет одной и той же клетки несколько раз.
  • Полученный результат подставляют в формулу, которая учитывает разведение. Итоговые цифры записывают на бланк исследования.

Раствор для подсчета эритроцитов

Для подсчета числа эритроцитов необходимо использовать реагенты, с помощью которых разводят полученную кровь:

  • хлорид натрия 0,9%;
  • сульфат натрия;
  • сублимат.

В методике дополнительно применяют следующие жидкости:

  • этиловый спирт – стерилизующий компонент, необходимый для дезинфекции камеры и покровного стекла;
  • дистиллированная вода – применяют после дезинфекции поверхности для устранения следов этилового спирта.

Какой способ для подсчета эритроцитов лучше?

Все методики для подсчета эритроцитов имеют положительные и отрицательные стороны. Использование полуавтоматического анализатора точнее, так как он не ошибается в обнаружении количества клеток при правильном использовании. Если считать клетки вручную, повышается риск врачебной ошибки.

Важно! Но у автоматических анализаторов имеется недостаток – отсутствие визуального осмотра клеток, обнаружения изменения формы, размера, диаметра, целостности.

Ошибки при подсчете эритроцитов

Возможно неправильно рассчитать количество красных кровяных телец, если были допущены ошибки при сборе, обработке, подсчете.

  • Неточное разведение вследствие увеличения или снижения количества крови или раствора для подсчета. Эритроциты будут находиться в минимальном и максимальном количестве перед объективом микроскопа. Врач может ошибочно поставить диагноз эритропения (снижение эритроцитов) или эритроцитоз (повышение эритроцитов).
  • Позднее введение антикоагулянта в собранную кровь, что вызывает образование сгустка. Следствие этого – требуется повторный забор крови.
  • Недостаточное перемешивание полученного раствора после разбавления. Реагент не распределяется в биологической жидкости, что полностью устраняет возможность подсчета клеток.
  • Недостаточные дезинфицирующие мероприятия в отношении счетного устройства. Врач может забыть предварительно протереть стёкла этиловым спиртом. Использование ваты вызовет попадание ее волокон на предметное стекло. Инородные предметы затрудняет исследование. Если счетную камеру после использования не опустить в стерилизующий раствор, дальнейшее применение будет невозможно.
  • Подсчет клеток сразу после залития биоматериала без ожидания паузы. Вследствие этого врачи не смогут посчитать эритроциты, так как биологическая жидкость будет двигаться и распределятся по сетке.
  • Ошибка в подсчете количества квадратов. Для каждой методики подсчета эритроцитов требуется считать клетки в определенном числе больших и малых квадратов.
  • Образование пузырьков воздуха. Через них невозможно рассмотреть биоматериал с помощью микроскопа.
  • Использование некачественных реактивов. Возможна закупка дешевых материалов или их использование после завершения срока годности.
  • Неправильная подготовка пациента к исследованию. Например, должна учитываться физическая активность. Подсчет эритроцитов до и после мышечной нагрузки дает разный результат.

Внимание! Часто врачи не замечают ошибки в проведенном исследовании. По этой причине рекомендовано проводить 2 анализа. Если оба из них показывают одинаковые результаты, исследование достоверно. Если обнаруживаются резкие изменения, анализ проводят в третий раз.

Подсчет количества эритроцитов в моче

Подсчёт числа красных кровяных телец в урине осуществляется с помощью использования метода по Нечипоренко в счётной камере. Для этого мочу помещают в пробирку, центрифугируют на больших оборотах. Выпадает осадок, который перемещают с помощью пипетки в счетную камеру.

Лаборант подсчитывает количество эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров. После этого используется микроскоп, который перемещают слева направо, вниз, справа налево. В норме не должно быть больше 1-2 эритроцитов на весь объем исследованной жидкости.

Узнай больше об анализе на эритроциты в моче при беременности!

Подсчет эритроцитов в ликворе

Подсчет эритроцитов в ликворе проводят при подозрении на ЧМТ со скрытым кровотечением. Полученную спинномозговую жидкость разводят с изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1:9.

Раствор перемешивают, с помощью стеклянной палочки жидкость добавляют в счетную камеру. После этого подсчитывает количество эритроцитов в 5 больших квадратах.

Полученные значения подставляют в формулу подсчета эритроцитов, которая учитывает разведение биологической жидкости.

Так как при получении черепно-мозговой травмы количество эритроцитов со временем увеличивается, рекомендовано проведение нескольких исследований. Это будет свидетельствовать об образовании внутричерепной гематомы.

С помощью методов подсчета количества эритроцитов можно узнать состояние кровеносной системы, обнаружить кровотечения. При проведении анализа важно использовать правильные реактивы.

В медицинской практике применяется ручной подсчет количества эритроцитов в периферической крови и применение полуавтоматического гематологического анализатора. После получения результатов важно обратиться к врачу, так как самостоятельная постановка диагноза невозможна.

Даже незначительное изменение параметров может свидетельствовать о нарушениях в организме.

Читайте подробно о методах подсчета количества лейкоцитов от врача.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro


Источник: https://mirmam.pro/podschet-kolichestva-eritrotsitov

Подсчет эритроцитов в камере Горяева — каким образом происходит вычисление уровня эритроцитов?

Расчет количества эритроцитов

Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму.

их функция – транспортировка газов в тканях органов.

Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.

Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.

Строение камеры Горяева

Оптическое устройство – камера Горяева позволяет вычислить количество кровяных клеток в определенном объёме специальной жидкости. Идея создания устройства принадлежит русскому профессору Горяеву Н. К.

Главный элемент устройства – прозрачное предметное стекло с камерой, образованной углублением в форме прямоугольника, поверхность которой покрыта специальной микроскопической сеткой, и тонкое покровное стекло. Высокая точность результатов подсчета достигается благодаря повышенному объёму сетки в сравнении с аналогичными устройствами других типов.

Сетка устройства имеет площадь 9 мм2, размер одной стороны составляет 3 мм. Поверхность данного элемента образована квадратами общим числом в 225 шт. Из них одна сотня квадратов поделена на прямоугольники, еще столько же – не разграфлено, а 25 штук поделены на 16 более маленьких. Площадь 1 малого квадрата составляет 1/400 мм2, область над ним имеет объём 1/4000 мм3.

Разбавление крови с целью исследования

Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.

В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.

Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.

Разбавление крови в меланжере

Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.

Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.

Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101.

Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю.

Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.

Разбавление крови в пробирке

При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.

Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.

Подсчет количества эритроцитов

Камера Горяева обязательно располагается горизонтально. Всю площадь сетки аккуратно заполняют разведенным образцом. Важно проследить, чтобы не образовались пузырьки воздуха, ведь их наличие значительно исказит результат. В таком положении камера остается в течение одной минуты с целью оседания кровяных клеток.

Унифицированный метод подсчета эритроцитов проходит при среднем увеличении посредством микроскопического осмотра. Подсчет числа эритроцитов в камере Горяева ведут в 5 больших квадратах, поделенных на 16 малых.

Начало отсчета рекомендовано производить с большого квадрата, находящегося вверху слева, и далее по диагонали.

Важно! Чтобы количество клеток, находящихся на линиях малых квадратов, не было подсчитано дважды, рекомендуют пользоваться правилом Егорова: в каждом квадрате вести подсчет по двум определенным линиям (верхней и левой).

Начинают высчитывание клеток в малых квадратах в верхнем ряду слева направо от 1-го до 4-го в этом ряду. Переходя к следующему ряду, подсчет ведут в обратном порядке – справа налево. Переход к подсчету клеток в следующем большом квадрате производят после вычисления эритроцитов в этих 16 малых квадратах.

Непосредственно расчет числа эритроцитов ведут по формуле, отображенной на рисунке №2.

Обозначения в данной формуле расшифровываются следующим образом:

  • X – искомое число красных кровяных клеток в 1 мкл крови,
  • A обозначает количество сосчитанных клеток,
  • 200 – разбавление крови,
  • 80 – это количество малых посчитанных квадратов,
  • 1/4000 – объем маленького квадрата.

Внимание! Для достоверности результата расчет кровяных клеток при некоторых видах анемии необходимо проводить непосредственно после забора материала.

Возможные причины искажения результата

Как и любой другой лабораторный анализ, подсчет эритроцитов требует тщательной подготовки и аккуратности в исполнении. Искажение результатов анализа может возникнуть вследствие целого ряда причин. Оборудование хранят в сухом месте. Любая лабораторная работа, связанная с кровью, выполняется в резиновых перчатках.

Для начала следует убедиться в правильности подготовки и использования камеры. Перед работой и по ее окончании устройство необходимо тщательно промывать дистиллированной водой и насухо протирать мягкой тканью. Покровное стекло должно быть подготовлено заблаговременно таким же образом.

Возможные причины, влияющие на достоверность результата:

  • Некачественные реактивы, способные вызывать гемолиз.
  • Формирование сгустка крови в материале.
  • Неаккуратность в процессе забора крови в капилляр.
  • Плохо обработанные пробирки и пипетки.
  • Недобросовестная техника исполнения при работе с камерой и подсчете эритроцитов.
  • Высчитывание клеток сразу же после заполнения камеры (необходимо выждать 1 минуту, чтобы они успели осесть на поверхность).

В последнее время все большую популярность получает метод подсчета эритроцитов с использованием электронных счетчиков автоматического типа. Такая тенденция вполне обоснованна, так как автоматизированный процесс исследования значительно точнее и менее трудоёмок.

Принцип действия данного оборудования основан на разном показателе электропроводности клеток крови и раствора, в котором они помещены. Специальное электромагнитное устройство регистрирует изменение уровня сопротивления электрической цепи, когда эритроциты движутся через отверстие капилляра. Уже через несколько секунд на цифровом табло высвечивается результат с высчитанным числом клеток.

Повышенный показатель красных кровяных клеток в анализе называется полицитемией. Данное состояние возникает вследствие патологий, характеризующихся потерей жидкости в организме, например при диарейном синдроме.

Часто такое явление наблюдается на первых этапах инфекционных заболеваний, при отравлении токсичными веществами и прочем. Снижение же концентрации эритроцитов в крови известно как олигоцитемия.

И зачастую такая патология проявляется во время различного вида анемии.

Загрузка…

Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/metod-podscheta-kolichestva-eritroczitov-v-krovi-s-pomoshhyu-kamery-goryaeva

Books-med
Добавить комментарий